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產(chǎn)品名稱(chēng)： DH 10β Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)： CSKT102L
貨期： 現(xiàn)貨
價(jià)格與訂購(gòu)： 360
數(shù)量：

庫(kù)存： 5
規(guī)格： 200×100ul

產(chǎn)品信息
如何訂購(gòu)

產(chǎn)品規(guī)格

RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞

基因型

F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galK rpsL nupG λ-

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產(chǎn)品說(shuō)明

DH 10β菌株來(lái)源于MC1061菌株，消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS的限制系統(tǒng)，使DH 10β感受態(tài)細(xì)胞適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA，允許構(gòu)建更多具有代表性的基因組文庫(kù)。recA1和endA1的突變有利于穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。rpsL賦予其鏈霉素抗性，φ80lacZ?M15 的存在使DH 10β可用于藍(lán)白斑篩選。DH 10β感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg DNA。

操作方法

一、熱激轉(zhuǎn)化法

1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后，吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過(guò)夜預(yù)冷的搖菌管中，加入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕輕混勻，冰浴30分鐘。

2. 42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)搖菌管。

3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB（SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率），37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。

4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法

注：在使用卡那霉素，四環(huán)素等作為篩選抗性時(shí)，需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率，當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時(shí)，該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基，在37℃ 180rpm孵育1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。

2. DH 10β感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置5分鐘。

3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，涂均勻，表面無(wú)水漬。

4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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注意事項(xiàng)

1. 剛剛化凍的細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率最高。

2. 避免反復(fù)化凍。

3. 避免移液槍吹吸。

4. 整個(gè)操作過(guò)程要輕柔。

5. 重組產(chǎn)物不建議用10分鐘快速轉(zhuǎn)化法。

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