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- 產(chǎn)品名稱： Reverse Transcriptase Ⅲ
- 產(chǎn)品貨號(hào)： CSRT0912
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu)： 1400
- 數(shù)量：
庫(kù)存： 100
- 規(guī)格： 10KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品概述
Reverse TranscriptaseⅢ是通過(guò)體外大腸桿菌表達(dá)體系分子進(jìn)化技術(shù)篩選獲得的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與原始逆轉(zhuǎn)錄酶相比，其 cDNA 合成速度快，且熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達(dá) 60℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的 RNA 模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Reverse TranscriptaseⅢ合成全長(zhǎng) cDNA 的能力也有了提升，可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá) 19.8 kb 的 cDNA。
產(chǎn)品組分
| 組 分 | CSRT0912 (10,000 U) |
| Reverse TranscriptaseⅢ (200 U/μl) | 50 μl |
| 5×BufferReverse TranscriptaseⅢ Buffer | 250 μl |
保存條件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃運(yùn)輸。
適用范圍
全長(zhǎng) cDNA 文庫(kù)構(gòu)建；終點(diǎn)法 PCR；實(shí)時(shí)定量 PCR 等。
單位定義
以Poly(rA)·Oligo(dT)為模板/引物，在37℃，10 min條件下，摻入1 nmol的dTTP為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
注意事項(xiàng)
請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管、槍頭等耗材均需保證RNase-free。
第一鏈 cDNA 合成操作步驟
1. RNA 變性（此步為可選步驟，RNA 變性有助于打開(kāi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈 cDNA 的產(chǎn)量。）
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL 體系）
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
【注】：1）當(dāng)使用 Random Primers 時(shí)，需 25℃，孵育 5 min；若使用 Oligo (dT)18 或 Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用 55℃；對(duì)于高 GC 含量模板或者復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到 60℃；
3) 可將逆轉(zhuǎn)錄時(shí)間延長(zhǎng)到 45-60min，有助于提高產(chǎn)量；
4）85℃加熱 5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù) PCR 或 qPCR 反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長(zhǎng)期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
Note
For research use only .
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